體外診斷試劑產(chǎn)品注冊技術(shù)審評報告

產(chǎn)品中文名稱：醛酮還原酶 1B10 測定試劑盒（時間分辨熒光免疫分析法）

產(chǎn)品管理類別：第三類

申請人名稱：湖南萊拓福生物科技有限公司

國家藥品監(jiān)督管理局

醫(yī)療器械技術(shù)審評中心

基本信息

一、申請人名稱

湖南萊拓福生物科技有限公司?

二、申請人住所?

湖南省寧鄉(xiāng)市金洲新區(qū)金沙東路027號?

三、生產(chǎn)地址?

湖南省寧鄉(xiāng)市金洲新區(qū)金沙東路027號

技術(shù)審評概述

一、產(chǎn)品概述

（一）產(chǎn)品主要組成成分

本檢測試劑由校準品（6瓶/組）、生物素標記物、銪標記物、濃縮洗液、生物素標記物緩沖液、銪標記物緩沖液、包被酶標板、增強液、校準品稀釋液、封片、自封袋組成。

其中包被酶標板上包被有兔抗AKR1B10多克隆抗體，生物素標記物為生物素標記鼠抗AKR1B10單克隆抗體。

（二）產(chǎn)品預期用途

用于體外定量檢測人血清中AKR1B10的含量。臨床主要用于對確診且術(shù)前AKR1B10陽性的原發(fā)性肝細胞肝癌手術(shù)患者進行動態(tài)監(jiān)測以輔助判斷疾病進程或手術(shù)治療效果，不能作為原發(fā)性肝細胞肝癌早期診斷或確診的依據(jù)，不用于普通人群的腫瘤篩查。

（三）產(chǎn)品包裝規(guī)格

96人份/盒。

（四）產(chǎn)品檢驗原理

試劑盒采用雙抗體夾心時間分辨熒光免疫分析法（IFMA法）定量檢測人血清中AKR1B10蛋白濃度。以兔抗 AKR1B10多克隆抗體包被反應板，用生物素（Biotin）標記鼠抗AKR1B10單克隆抗體做檢測抗體，用銪標記鏈霉親和素（Streptavidin-Eu）作為發(fā)光標記物。

檢測時，將待測樣本加入反應板微孔，樣本中的 AKR1B10與包被于微孔表面的兔抗AKR1B10多克隆抗體結(jié)合。洗滌后，加入生物素標記鼠抗AKR1B10單克隆抗體，鼠抗AKR1B10單克隆抗體與結(jié)合在反應板上的AKR1B10蛋白結(jié)合，洗滌后，加入銪標記鏈霉親和素，銪標記鏈霉親和素與結(jié)合在反應板上的鼠抗AKR1B10單克隆抗體上標記的生物素反應，在微孔表面形成免疫復合物：兔抗AKR1B10多克隆抗體 -AKR1B10蛋白-鼠抗AKR1B10單克隆抗體-Biotin-Streptavidin-Eu。洗滌除去游離的銪標記鏈霉親和素，加入增強液將復合物上的Eu3+解離到溶液中，并與增強液中的有效成份形成高熒光強度的螯合物，其熒光強度與樣本中的AKR1B10蛋白濃度成正比。通過劑量-反應標準曲線得出樣本AKR1B10濃度值。

二、臨床前研究概述

（一）主要原材料

1.主要原材料的選擇

本產(chǎn)品的主要原材料包括：銪標記鏈霉親和素、醛酮還原酶1B10（AKR1B10）抗原、兔抗AKR1B10多克隆抗體、生物素標記鼠抗AKR1B10單克隆抗體，其中醛酮還原酶1B10抗 原、兔抗AKR1B10多克隆抗體、生物素標記鼠抗AKR1B10單克隆抗體為申請人自行研制生產(chǎn)，其余原材料均為外購方式獲得。申請人選擇有資質(zhì)的供應商提供的原料，通過功能性試驗，篩選出最佳原材料和合格供應商，并制定了各主要原材料的技術(shù)要求和質(zhì)量標準并經(jīng)檢驗合格。

2.企業(yè)參考品設置情況

申請人設計了完整的企業(yè)參考品，包括線性參考品、空白限參考品、重復性參考品、準確度參考品、特異性參考品。具體如下：

線性參考品 1 份，為臨床陽性樣本，經(jīng)添加稀釋的AKR1B10抗原溶液制備而成，濃度為5700~6000pg/mL。

空白限參考品1份，為校準品稀釋液。

重復性參考品2份，為臨床陽性樣本，經(jīng)添加稀釋的 AKR1B10抗原溶液制備而成，濃度分別為1800~2200pg/mL和900~1100pg/mL。

準確度參考品2份，為臨床陽性樣本，經(jīng)添加稀釋的 AKR1B10抗原溶液制備而成，濃度分別為4000~5000pg/mL和0~500pg/mL。

特異性參考品2份，為市售的AFP、CEA抗原，用稀釋緩沖液稀釋制備而成，AFP特異性參考品濃度為1000±100ng/mL，CEA特異性參考品濃度為100±10ng/mL。

（二）生產(chǎn)工藝及反應體系研究

申請人通過對試劑主要生產(chǎn)工藝的研究，確定了最佳生產(chǎn)工藝。申請人對反應體系研究包括樣本要求、樣本用量、試劑用量、各檢測步驟的反應時間、洗滌次數(shù)等，通過一系列研究，最終確定了最佳的反應體系。通過10份不同濃度的AKR1B10陽性血清樣本體外37℃模擬實驗研究確定，標志物的半衰期為22.3h。

（三）分析性能評估

本產(chǎn)品分析性能評估內(nèi)容包括外觀、線性、空白限、精密度、準確度、特異性、干擾因素的評估等。申請人提交了三批產(chǎn)品在適用機型上的性能評估資料。

在線性性能評估中，申請人對線性參考品與低值血清或生理鹽水等比稀釋6個濃度水平的樣本進行檢測，結(jié)果顯示本產(chǎn)品在105pg/mL~6000pg/mL范圍內(nèi)，線性相關系數(shù)r不低于0.9900，符合要求。

在空白限性能評估中，申請人對空白限參考品重復測定20次，計算濃度值，最終確定并驗證本試劑盒的空白限為100pg/mL。

在精密度性能評估中，申請人對不同濃度的參考品（含高值、低值和cutoff值附近濃度值）進行檢測，分別評估了批內(nèi)、批間、室內(nèi)、室間、日內(nèi)、日間、不同操作者、不同儀器之間的精密度。結(jié)果顯示：檢測結(jié)果的變異系數(shù)（CV值）均不高于10.0%，表明本產(chǎn)品的批內(nèi)、批間、室內(nèi)、室間、日內(nèi)、日間、不同操作者、不同儀器之間的重復性均符合要求。

在準確度性能評估中，申請人對準確度參考品（含高值和低值兩個濃度水平）按比例混合，進行檢測，計算回收率，符合要求。

在特異性性能評估中，申請人對兩個特異性參考品進行檢測，結(jié)果顯示檢測結(jié)果均不高于100pg/mL，符合要求。

在干擾因素的性能評估中，申請人對常見干擾物質(zhì)（溶血、脂血、黃疸、生物素）、自身免疫性抗體（類風濕因子、抗核抗體、人抗鼠抗體）、結(jié)構(gòu)相似的蛋白（AKR1B1）、?？鼓[瘤藥物（索拉非尼、奧沙利鉑、表柔比星）、常見解熱抗炎藥物（阿司匹林）、常見病原體（乙型肝炎表面抗原）、肝部異常常規(guī)檢測相關生物標志物（甲胎蛋白）、腸道異常常規(guī)檢測相關生物標志物（癌胚抗原、糖類抗原19-9）等進行了研究。

結(jié)果顯示：低于表1中濃度指標的干擾物質(zhì)不會對本產(chǎn)品的檢測結(jié)果產(chǎn)生干擾；抗核抗體ANA不影響實驗結(jié)果；人抗鼠抗體（HAMA）、類風濕因子（RF）對本產(chǎn)品有干擾。

（四）陽性判斷值研究

申請人采用ROC曲線法確定陽性判斷值。申請人用本產(chǎn)品對107例臨床病理確診為原發(fā)性肝細胞肝癌患者術(shù)前血清標本和447例健康人血清標本，30例乙型肝炎標本，30例其他肝部良性疾病標本，30例肝硬化標本，30例轉(zhuǎn)移性肝癌標本，進行檢測，采用受試者工作特征（ROC）曲線方法確定臨界值（cutoff）為215pg/mL。

申請人另對201例健康人血清樣本進行檢測，其檢測數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布，血清AKR1B10檢測結(jié)果P95為213.225pg/mL，經(jīng)四舍五入后確定95%＜213pg/mL。

（五）穩(wěn)定性研究

申請人對本產(chǎn)品的實時穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性等進行了研究，確定了各種條件下本產(chǎn)品的有效保存時間；同時對不同溫度儲存條件下臨床樣本儲存穩(wěn)定性及凍融穩(wěn)定性進行了研究，確定了各種儲存條件下臨床樣本的有效保存時間及凍融次數(shù)。

產(chǎn)品實時穩(wěn)定性研究：采用三批試劑進行研究，試劑保存在2~8℃條件下，分別保存0、1、2、3、6、9、11、12、13、14個月時取出，對試劑盒外觀、線性、空白限、重復性、準確度和特異性進行考察，各項性能指標均符合要求。因此確定申報產(chǎn)品的效期穩(wěn)定性為：2~8℃保存，有效期為12個月。樣本穩(wěn)定性：采用10個不同濃度的臨床血清樣本分別放置在-80℃、-20℃、2~8℃、20~25℃條件下存放一定時間后取出，用本產(chǎn)品檢測樣本中AKR1B10濃度，與血清初濃度相比較，看濃度是否發(fā)生明顯變化，以確定在對應溫度儲存條 件下的樣本穩(wěn)定性，結(jié)果顯示：血清樣品在20~25℃環(huán)境下可以保存8小時，在2～8℃環(huán)境下可以保存7天；如果需要長期保存，則建議在-80℃或-20℃環(huán)境下保存（-20℃環(huán)境下可以保存12個月）。

三、臨床評價概述

申請人在中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)院、湖南省人民醫(yī)院和湖南省腫瘤醫(yī)院共三家臨床試驗機構(gòu)完成了臨床試驗。

臨床試驗采用試驗用體外診斷試劑與病理診斷結(jié)果進行比較研究的方法，對產(chǎn)品臨床性能進行評價。入組病例包括原發(fā)性肝細胞肝癌、肝硬化、病毒性肝炎、其他肝部良性疾病、其他惡性腫瘤患者及干擾樣本，樣本類型為非抗凝血清樣本。臨床試驗共入組受試者1584例，其中非隨訪病例1483例，隨訪病例101例。實驗結(jié)果顯示：1483例非隨訪病例中，申報產(chǎn)品與病理診斷結(jié)果對比，靈敏度為71.90%（95%CI：67.63%，76.16%），特異度為82.20%（95%CI：79.89%，84.50%），總符合率為79.23%（95%CI：77.17%，81.30%），Kappa值為0.5164，（95%CI：0.4696,0.5633），結(jié)果顯示檢測結(jié)果與病理診斷結(jié)果具有中等一致性。

結(jié)果顯示檢測結(jié)果與病理診斷結(jié)果具有中等一致性。在101例隨訪病例中，受試者在接受肝癌切除術(shù)后1~2天內(nèi)， 血清 AKR1B10 水平與術(shù)前相比呈現(xiàn)大幅度下降，其 AKR1B10平均下降率為50.59%±27.79%，至術(shù)后3~4天時， AKR1B10平均下降率達68.47%±27.35%，至術(shù)后1~3個月時， AKR1B10平均下降率達69.74%±27.88%，表明患有原發(fā)性肝細胞肝癌的受試者接受有效手術(shù)治療后，其血清AKR1B10平均水平呈下降趨勢。

全部隨訪的101例病例中有70例受試者術(shù)前AKR1B10結(jié)果為陽性，此部分病例中，申報產(chǎn)品術(shù)后檢測結(jié)果與術(shù)后影像學結(jié)果對比，其陽性符合率為88.89%（95%CI：51.75%， 99.72%），陰性符合率為86.89%（95%CI：75.78%，94.16%），總符合率為87.14%（95%CI：76.99%，93.95%）。

綜上，該產(chǎn)品臨床試驗設計符合《體外診斷試劑臨床試驗技術(shù)指導原則》的相關要求，臨床試驗結(jié)果顯示該產(chǎn)品臨床性能可較好滿足臨床需求。

四、產(chǎn)品受益風險判定

根據(jù)申請人提供的申報資料，經(jīng)綜合評價，在目前認知水平上，認為該產(chǎn)品能夠較大程度地滿足醫(yī)療需求，預期為適用人群帶來的受益大于風險。但為保證用械安全，基于對主要剩余風險的規(guī)避，需在說明書中提示以下信息：

1.AKR1B10的水平不能用作肝細胞肝癌或其他疾病存在與否的絕對證據(jù)，AKR1B10的檢測結(jié)果可以和其他診斷檢查手段聯(lián)合應用，但不應取代任何已存在的臨床檢查。

2.術(shù)前AKR1B10陰性的原發(fā)性肝細胞癌手術(shù)患者不宜使用AKR1B10指標進行動態(tài)監(jiān)測以輔助判斷疾病進程或手術(shù)治療效果。

3.AKR1B10指標在部分肝硬化與肝內(nèi)膽管細胞癌中有非特異性表達，提示該指標宜用于確診的原發(fā)性肝細胞肝癌手術(shù)患者進行動態(tài)監(jiān)測以輔助判斷疾病進程或手術(shù)治療效果，不能作為原發(fā)性肝細胞肝癌早期診斷或確診的依據(jù)。

綜合評價意見

本申報項目為境內(nèi)第三類醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊，屬于境內(nèi)同品種首個產(chǎn)品。申請人的注冊申報資料符合現(xiàn)行要求，依據(jù)《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》（國務院令第 680 號）、《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令 2014 年第 5 號）等相關醫(yī)療器械法規(guī)與配套規(guī)章，經(jīng)系統(tǒng)評價后，建議準予注冊。

2022 年 1 月 24 日

附件：產(chǎn)品說明書

??醛酮還原酶 1B10 測定試劑盒（時間分辨熒光免疫分析法）說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：醛酮還原酶 1B10 測定試劑盒（時間分辨熒光免疫分析法）

【包裝規(guī)格】

96 人份/盒

【預期用途】

本產(chǎn)品適用于體外定量檢測人血清中AKR1B10 的含量。臨床主要用于對確診且術(shù)前 AKR1B10 陽性的原發(fā)性肝細胞肝癌手術(shù)患者進行動態(tài)監(jiān)測以輔助判斷疾病進程或手術(shù)治療效果，不能作為原發(fā)性肝細胞肝癌早期診斷或確診的依據(jù)，不用于普通人群的腫瘤篩查。

醛酮還原酶 1B10（Aldo-keto Reductase 1B10，AKR1B10），也稱醛糖還原酶相似蛋白-1（ARL-1）。該蛋白由 316 個氨基酸構(gòu)成，分子量為36.02 kDa。在正常人體組織中，AKR1B10 主要在小腸和結(jié)腸中高表達，在肝臟中有極低水平表達。AKR1B10 蛋白通過調(diào)節(jié)脂肪酸/脂質(zhì)代謝和消除活性羰基有毒化合物而促進細胞生存與生長。

研究發(fā)現(xiàn)，70%以上的原發(fā)性肝細胞肝癌患者血清中的 AKR1B10 含量明顯升高；原發(fā)性肝細胞肝癌初治患者經(jīng)手術(shù)切除腫瘤后，術(shù)后血清中的 AKR1B10 含量明顯降低。高水平的 AKR1B10 血清水平增高主要見于原發(fā)性肝細胞肝癌。肝硬化、膽管細胞癌中的 AKR1B10 水平會出現(xiàn)輕度升高。

沒有文獻報道經(jīng)過其它有效治療（包括放療、化療和抗腫瘤治療等）的肝細胞肝癌患者 、孕婦或哺乳期女性、肝細胞肝癌合并患有其他癌癥的患者中AKR1B10的水平。

【檢驗原理】

本試劑盒采用雙抗體夾心時間分辨熒光免疫分析法（IFMA 法）定量檢測人血清中 AKR1B10 蛋白濃度。以兔抗 AKR1B10 多克隆抗體包被反應板，用生物素標記鼠抗 AKR1B10 單克隆抗體做檢測抗體，用銪標記鏈霉親和素作為發(fā)光標記物。待測樣本加入反應板微孔后，樣本中的 AKR1B10 與包被于微孔表面的兔抗 AKR1B10 多克隆抗體結(jié)合。洗滌后，加入生物素（biotin）標記的鼠抗 AKR1B10 單克隆抗體，鼠抗 AKR1B10 單克隆抗體與結(jié)合在反應板上的 AKR1B10 蛋白結(jié)合，洗滌后，加入銪標記的鏈霉親和素（Streptavidin-Eu），銪標記的鏈霉親和素與結(jié)合在反應板上的鼠抗 AKR1B10 單克隆抗體上標記的生物素反應，在微孔表面形成免疫復合物：兔抗 AKR1B10 多克隆抗體-AKR1B10 蛋白-鼠抗 AKR1B10單克隆抗體-Biotin-Streptavidin-Eu。洗滌除去游離的銪標記鏈霉親和素，加入增強液將復合物上的 Eu3+解離到溶液中，并與增強液中的有效成份形成高熒光強度的螯合物，其熒光強度與樣本中的 AKR1B10 蛋白濃度成正比。通過劑量——反應標準曲線得出樣本 AKR1B10 濃度值。

【主要組成成分】

1. AKR1B10 校準品，6 瓶，凍干品，內(nèi)含重組 AKR1B10 蛋白（表達載體：pQE80L）， Tris-HCl 緩沖液，含有一定量的 BSA，防腐劑。分別為 A、B、C、D、E、F；分別為 0 pg/mL、375 pg/mL、750 pg/mL、1500 pg/mL、3000 pg/mL、6000 pg/mL；用時以 1mL 校準品稀釋液溶解。（溯源到湖南萊拓福生物科技有限公司 AKR1B10 工作校準品）。

2. 生物素標記物：1 瓶（0.24mL）；生物素標記的鼠抗 AKR1B10 單克隆抗體濃 ?20μg/mL，Tris-HCl 緩沖液，含有一定量的 BSA，防腐劑。使用前按需求量用生物素標記物緩沖液作 1:50 倍稀釋。

3. 銪標記物：1 瓶（12μL）；內(nèi)含銪標記的鏈霉親和素濃度 100μg/mL，Tris-HCl 緩沖液，含有一定量的 BSA，防腐劑。使用前 按需求量用銪標記物緩沖液作 1:1000 倍稀釋。

4. 濃縮洗液：1 瓶（40mL），Tris-HCl 緩沖液，含有一定量的氯化鈉、吐溫-20。使用前用去離子水作 1:25 倍稀釋。

5. 生物素標記物緩沖液：1 瓶（12mL），Tris-HCl 緩沖液，含有一定量的 BSA，防腐劑。

6. 銪標記物緩沖液：1 瓶（12mL），Tris-HCl 緩沖液，含有一定量的 BSA，防腐劑。

7. 包被酶標板：1 塊（12×8，包被有兔抗 AKR1B10 多克隆抗體）；濃度 10μg/mL。

8. 增強液：1 瓶（12mL），直接使用。

9. 校準品稀釋液：1 瓶（12mL），Tris-HCl 緩沖液，含有一定量的 BSA，防腐劑。

10. 封片：3 片（封板用）。

11. 自封袋：1 個。注：不同批號的試劑盒中的組分不能混用。

需要，但未提供的物品：

AKR1B10 質(zhì)控品：生產(chǎn)商：湖南萊拓福生物科技有限公司，貨號：LTF0010，內(nèi)含重組 AKR1B10 蛋白，防腐劑。

【儲存條件及有效期】

試劑盒應在 2~8℃下干燥保存，有效期為 12 個月，貯存時避免重壓并應防潮、避光、避熱。

開封后置于 2~8℃干燥可保存 7 天，其中酶標板開封后應放置于自封袋中保存，凍干粉復溶后立即使用。生產(chǎn)日期及有效期：見包裝標簽。

【適用儀器】

蘇州新波生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的 ANYTEST、ANYTEST-NZ 時間分辨熒 光分析儀和 EasyCuta 全自動時間分辨熒光分析儀。

廣州市豐華生物工程有限公司生產(chǎn)的 AutoTRFIA-4 自動熒光免疫分析儀。

深圳市愛康生物科技有限公司生產(chǎn)的 DR6660-4 自動時間分辨熒光免疫分析儀。

【樣本要求】

血清樣品在 20~25℃環(huán)境下可以保存 8 小時，在 2～8℃環(huán)境下可以保存 7 天；如果需要長期保存，則建議在-80℃或-20℃環(huán)境下保存（-20℃環(huán)境下可以 保存 12 個月）；凍融次數(shù)不得超過 2 次，避免反復凍融。避免溶血、脂血的樣品。

【檢驗方法】

1. 試劑的準備：將 40mL 濃縮洗液和 960mL 去離子水在干凈的洗液瓶中混合，作為工作洗滌液備用。建議按需求量進行稀釋。

2. 將試劑盒所有組分、待測樣品和所需數(shù)量的微孔反應條平衡至室溫（20~25℃）。校準品開啟后請盡快使用并盡量避免重復使用。板條若一次未能用完，剩余板條用自封袋封口后密封保存。在使用前 1 小時內(nèi)稀釋生物素標記物和銪標記物，配好的標記物要在 1 小時內(nèi)使用，如沒有使用或用剩的標記物應丟棄。

3. 吸取 100μL AKR1B10 校準品或待檢樣本，按順序加入微孔反應條小孔中并加貼封片，室溫慢速振動孵育 60 分鐘。

4. 稀釋生物素標記抗體：用生物素標記抗體緩沖液按 1:50 稀釋生物素標記抗體，混勻制成生物素標記物工作液，備用。建議按需求量進行稀釋。

5. 在第一次孵育（步驟 3）結(jié)束后，小心將微孔反應條上的封片揭下并棄掉，將微孔反應條放入洗板機吸干各孔并每孔注入洗滌液 400μL，再吸干各孔，重復以上洗滌 3 次，共洗滌 4 次。最后一次洗滌后將微孔反應條在無塵紙上拍干。

6. 每孔中加入 100μL 生物素標記抗體，并加貼封片，室溫慢速振動孵育 40 分 鐘。

7. 稀釋銪標記物：用銪標記物緩沖液按 1:1000 稀釋銪標記物，混勻，制成銪標記物工作液，備用。建議按需求量進行稀釋。

8. 第二次孵育（步驟 6）結(jié)束后，小心將微孔反應條上的封片揭下并棄掉，將微孔反應條放入洗板機吸干各孔并每孔注入洗滌液 400μL，再吸干各孔，重復以上洗滌 3 次，共洗滌 4 次。最后一次洗滌后將微孔反應條在無塵紙上拍干。

9. 每孔中加入 100μL 銪標記物工作液，并加貼封片，室溫慢速振動孵育 30 分鐘。

10. 第三次孵育（步驟 9）結(jié)束后，小心將微孔反應條上的封片揭下并棄掉，將微孔反應條放入洗板機吸干各孔并每孔注入洗滌液 400μL，再吸干各孔，重復以上洗滌 3 次，共洗滌 4 次。最后一次洗滌后將微孔反應條在無塵紙上拍干。

11. 每一孔中加入增強液 100μL（加樣過程中避免碰到小孔邊緣或其中的試劑，

避免污染），微孔反應條在室溫下，用振蕩儀輕搖 5 分鐘。

12. 結(jié)果測定：測量時，檢查程序的參數(shù)是否如下所示。如不符，請修改。

ASSAY TYPE（分析類型）：IFMA（時間分辨熒光免疫分析法）

FITTING METHOD（曲線擬合方式）：LINEAR FIT（線性擬合）

X-AXIS（X 軸）：LOG

Y-AXIS（Y 軸）：LOG-B

BLANKS（背景孔數(shù)）：2

STANDARDS（校準品）：5

STANDARDS REPLICATES（校準品復孔數(shù)）：2

STANDARD CONC（校準品濃度）：B

STANDARD CONC（校準品濃度）：C

STANDARD CONC（校準品濃度）：D

STANDARD CONC（校準品濃度）：E

STANDARD CONC（校準品濃度）：F

UNKNOWN REPLICATES（待測樣品孔數(shù)）：1

【參考區(qū)間】

用本試劑盒對 107 例臨床病理確診為原發(fā)性肝細胞肝癌患者術(shù)前血清標本 和 447 例健康人血清標本，30 例病毒性肝炎標本，30 例其他肝部良性疾病標本， 30 例肝硬化標本，30 例轉(zhuǎn)移性肝癌標本，進行檢測，采用受試者工作特征（ROC）曲線方法確定臨界值（cutoff）為 215pg/mL。對 201 例健康人血清樣本進行檢測，其檢測數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布，血清 AKR1B10檢測結(jié)果 95%＜213 pg/mL。注：本試劑參考區(qū)間的建立僅針對臨床試驗樣本，建議各實驗室根據(jù)各自地區(qū)人群、年齡、性別、飲食等情況，建立各自的參考區(qū)間。

【檢驗結(jié)果的解釋】

以下兩點如不符合要求，應重新進行實驗。

（1）劑量反應標準曲線的線性相關系數(shù) r 值應＞0.9900。

（2）呈非典型的劑量反應曲線。若樣本中的 AKR1B10 含量大于 6000pg/mL，請用生理鹽水 稀釋后再測量， 稀釋后濃度應在測量范圍內(nèi)（可用生理鹽水做 1:1~1:20 倍稀釋，稀釋完應盡快檢驗）。

【檢驗方法的局限性】

1. 測試時必須嚴格按照說明書步驟操作，否則可能會產(chǎn)生錯誤結(jié)果；樣本若存在個別操作及技術(shù)上的原因，會造成結(jié)果出錯；若結(jié)果可疑，請重新測試。

2. AKR1B10 的水平不能用作肝細胞肝癌或其他疾病存在與否的絕對證據(jù)， AKR1B10 的檢測結(jié)果可以和其他診斷檢查手段聯(lián)合應用，它不應取代任何已存在的臨床檢查。

3. 術(shù)前 AKR1B10 陰性的原發(fā)性肝細胞癌手術(shù)患者不宜使用 AKR1B10 指標進行動態(tài)監(jiān)測以輔助判斷疾病進程或手術(shù)治療效果。

4. AKR1B10 指標在部分肝硬化與肝內(nèi)膽管細胞癌中有非特異性表達，提示該指標僅可用于確診的原發(fā)性肝細胞肝癌手術(shù)患者進行動態(tài)監(jiān)測以輔助判斷疾病 進程或手術(shù)治療效果，不能作為原發(fā)性肝細胞肝癌早期診斷或確診的依據(jù)。

5. AKR1B10 的半衰期為 22.3h（該半衰期通過 10 份不同濃度的 AKR1B10 陽性血清樣本體外 37℃模擬實驗研究確定）。

【產(chǎn)品性能指標】

1. 線性：試劑盒在 105 pg/mL~6000 pg/mL 范圍內(nèi)，線性相關系數(shù) r 應不低于

0.9900。

2. 空白限：不高于 100pg/mL。

3. 重復性：變異系數(shù) CV 不高于 10.0%。

4. 批間差：批間變異系數(shù) CV 不高于 15.0%。

5. 準確度：回收率應在 85%~115%范圍內(nèi)。

6. 分析特異性及干擾：

6.1 特異性：測定 1000 ng/mL 的 AFP、100 ng/mL 的 CEA，測定結(jié)果應不高于 100 pg/mL。

6.2 干擾：在血紅蛋白濃度≤300mg/dL、甘油三酯濃度≤600mg/dL、膽紅素濃度

≤40mg/dL、生物素濃度≤40ng/mL 濃度水平下，干擾率在預期值±10%以內(nèi)。結(jié)構(gòu)類似物：AKR1B1≤50ng/mL；常見抗腫瘤藥物：索拉非尼濃度≤100μg/mL、奧沙利鉑濃度≤100μg/mL、表柔比星濃度≤100μg/mL；常見解熱抗炎藥物：阿司匹林濃度≤500μg/mL、常見病原體：HBsAg 濃度≤160mIU/mL；常見肝部異常標志物：AFP 濃度≤1000ng/mL；常見腸道異常標志物：CEA 濃度≤500ng/mL、 CA19-9 濃度≤800U/mL；干擾率在預期值±10%以內(nèi)。抗核抗體 ANA 不影響實驗結(jié)果；人抗鼠抗體（HAMA）、類風濕因子（RF）對本產(chǎn)品有干擾。

7. 精密度：精密度依據(jù)美國國家臨床實驗室標準化委員會（NCCLS）EP5-A2 方案制定，對 3 份 AKR1B10 樣本，采用同一批試劑，每天做 2 批，每批重復檢測 2 次，共進行 20 天，實驗結(jié)果如下：

8. 檢測 81 例肝內(nèi)膽管細胞癌樣本，檢測結(jié)果大于參考區(qū)間的樣本有 33 例，提示 AKR1B10 指標在部分肝內(nèi)膽管細胞癌中有非特異性表達。

9. 臨床試驗研究的 1483 例非隨訪病例中，申報產(chǎn)品與病理診斷結(jié)果對比，靈敏度為 71.90%（95%CI：67.63%，76.16%），特異度為 82.20%（95%CI：79.89%，84.50%），總符合率為 79.23%（95%CI：77.17%，81.30%）。全部隨訪的 101 例病例中有 70 例受試者術(shù)前 AKR1B10 結(jié)果為陽性，此部分病例中，申報產(chǎn)品術(shù) 后檢測結(jié)果與術(shù)后影像學結(jié)果對比，其陽性符合率為88.89%（95%CI：51.75%， 99.72%），陰性符合率為 86.89%（95%CI：75.78%，94.16%），總符合率為 87.14%（95%CI：76.99%，93.95%）。

【注意事項】

1. 本品預期由醫(yī)院有檢驗資質(zhì)人員使用，僅用于體外診斷使用，請勿重復使用，不同批號的試劑盒中的組分不能混用，過期產(chǎn)品勿用。

2. 應避免實驗環(huán)境溫度過高，低溫保存的試劑組分和待測樣品需要平衡至室溫。

3. 為保證實驗的準確性，處理血清樣本時應做到?jīng)]有纖維蛋白、紅細胞等，并要保證血清樣本吸取的量的準確性，否則容易引起測量值的差異。

4. 洗板機在洗滌時，確認微孔板注滿洗液；洗滌完成后保證微孔殘留液最??；最后一次洗滌時將微孔板倒扣于無塵吸水紙上拍干。

5. 加增強液時吸頭應懸空，避免碰到小孔邊緣或其中試劑造成增強液的污染。

6. 使用醫(yī)用蒸餾水或去離子水配制洗滌液。

7. 使用干凈的一次性容器配制銪標記物工作液，應避免銪標記物緩沖液進入未使用的銪標記物原液中。

8. 所有的待測樣品、洗滌液和各種廢棄物均應該作為潛在污染源對待，請按傳染病實驗室操作規(guī)范進行操作。

【參考文獻】

1.? Cao D, Fan ST, Chung SS. Identification and characterization of a novel human aldose reductase-like gene. J Biol Chem. 1998; 273(19): 11429-35.

2.? Liu Z, Yan R, Al-Salman A, Shen Y, Bu Y, Ma J, Luo DX, Huang C, Jiang Y, Wilber A, Mo YY, Huang MC, Zhao Y, Cao D. Epidermal growth factor induces tumour marker AKR1B10 expression through activator protein-1 signalling in hepatocellular carcinoma cells. Biochem J. 2012, 442(2): 273-82.

3.?Ye X, Li C, Zu X, Lin L, Liu Q, Liu J, Xu G, Chen Z, Xu Y, Liu L, Luo D, Cao Z, Shi G, Feng Z, Deng H, Liao Q, Cai C, Liao D, Wang J, Jin J, and Cao D. A Large- Scale Multicenter Study Validates AKR1B10 as a New Prevalent Serum Marker for Detection of Hepatocellular Carcinoma. Hepatology, 2019, 69(6):2489-2501.

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生產(chǎn)許可證編號：

【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術(shù)要求編號】

【說明書核準及修改日期】