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【CMDE】非衍生化氨基酸、肉堿、腺苷、溶血卵磷脂和琥珀酰丙酮測定試劑盒（串聯(lián)質(zhì) 譜法）注冊技術(shù)審評報告公開

日期:2022-04-20

受理號：CSZ1900199

體外診斷試劑產(chǎn)品注冊技術(shù)審評報告

產(chǎn)品中文名稱：非衍生化氨基酸、肉堿、腺苷、溶血卵磷脂和琥珀酰丙酮測定試劑盒（串聯(lián)質(zhì) 譜法）

產(chǎn)品管理類別：第三類

申請人名稱：蘇州新波生物技術(shù)有限公司

國家藥品監(jiān)督管理局

醫(yī)療器械技術(shù)審評中心

基本信息

一、申請人名稱

蘇州新波生物技術(shù)有限公司

二、申請人住所

江蘇省太倉經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)太平北路115號

三、生產(chǎn)地址

江蘇省太倉經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)太平北路115號

技術(shù)審評概述

一、產(chǎn)品概述

（一）產(chǎn)品主要組成成分

A盒組分：內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品、琥珀酰丙酮分析液、干血斑質(zhì)控品濾紙卡、U型底耐熱微孔板、粘性微孔板封套、與批次匹配的質(zhì)量控制證書、微孔板條碼。

B盒組分：流動相溶劑、萃取液（具體內(nèi)容詳見說明書）

（二）產(chǎn)品預(yù)期用途

試劑盒用于定量檢測新生兒全血干血斑中的氨基酸、琥珀酰丙酮、游離肉堿，酰基肉堿，腺苷和溶血卵磷脂的濃度。通過對這些分析物（表1）及其相互之間的關(guān)系進(jìn)行定量分析，從而有助于評估新生兒遺傳代謝性疾病。

表1試劑盒測定的具體分析物

1這些分析物結(jié)構(gòu)或分子量相同，無法通過串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行區(qū)分

該產(chǎn)品已經(jīng)臨床驗證的疾病與其相關(guān)的分析物關(guān)系如下表：

（三）產(chǎn)品包裝規(guī)格

480人份/盒、960人份/盒。

（四）產(chǎn)品檢驗原理

氨基酸、游離肉堿、?；鈮A、琥珀酰丙酮、2種腺苷以及溶血卵磷脂的測量過程包括使用含有內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品的溶液對新生兒干血斑進(jìn)行萃取并使用串聯(lián)質(zhì)譜(MSMS)系統(tǒng)進(jìn)行分析。每種分析物對其相應(yīng)的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品的響應(yīng)程度與該分析物的濃度成正比。

采用多反應(yīng)監(jiān)控模式同時對多種分析物進(jìn)行數(shù)據(jù)獲取，通過第一級四極桿質(zhì)量分析器根據(jù)各自的質(zhì)荷比對前體離子（即母離子）進(jìn)行篩選，而后通過碰撞室碰撞裂解為更小的碎片離子，隨后進(jìn)入第二級四極桿質(zhì)量分析器通過質(zhì)荷比對產(chǎn)物離子（即子離子）進(jìn)行篩選，最終到達(dá)檢測器得到信號。?

二、臨床前研究概述

（一）主要原材料

1．主要原材料的選擇產(chǎn)品的主要原材料包括：內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品原料（各種非放射性同位素標(biāo)記物）及干血斑質(zhì)控品，均為外購方式獲得。申請人選擇有資質(zhì)的供應(yīng)商提供的原材料，根據(jù)不同原料設(shè)置相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，制定了各主要原材料的技術(shù)要求和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)并經(jīng)檢驗合格。

2．企業(yè)參考品設(shè)置情況

申請人設(shè)計了完整的企業(yè)參考品，包括線性參考品，準(zhǔn)確度參考品、精密性參考品和靈敏度參考品。

參考品組成如下：

線性參考品：通過將未標(biāo)記的氨基酸、?；鈮A、琥珀酰丙酮、腺苷和溶血卵磷脂按一定量溶于50%-55%的血細(xì)胞比容的人全血配制，點斑干燥而成，為共6個濃度的干血片。

企業(yè)準(zhǔn)確度參考品、精密性參考品和靈敏度參考品：通過將未標(biāo)記的氨基酸、?；鈮A、琥珀酰丙酮、腺苷和溶血卵磷脂按一定量溶于50%-55%的血細(xì)胞比容的人全血配制點斑干燥而成，含低和高兩個水平。干血片分為三部分，分別作為準(zhǔn)確度參考品、精密性參考品和靈敏度參考品使用。

（二）生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究

申請人通過對試劑主要生產(chǎn)工藝的研究，確定了最佳生產(chǎn)工藝。試劑盒反應(yīng)體系的研究中，包含了內(nèi)標(biāo)濃度、干粉內(nèi)標(biāo)濃度和復(fù)溶體積、鹽酸肼的濃度、上樣體積及轉(zhuǎn)移體積、萃取反應(yīng)的溫度和反應(yīng)時間、衍生化反應(yīng)放置時間、萃取液及流動相成分配比、萃取工作液穩(wěn)定性等。申請人通過一系列研究，最終確定了最佳的反應(yīng)體系。

（三）分析性能評估

該產(chǎn)品分析性能評估內(nèi)容包括精密度、準(zhǔn)確度、線性、靈敏度、干擾、殘留、漂移等。申請人提交了有效運行的質(zhì)量管理體系下生產(chǎn)的三批產(chǎn)品在適用機(jī)型QSight210MD三重四極桿質(zhì)譜系統(tǒng)、SCIEX公司的API3200MD?三重四極桿質(zhì)譜儀、ABSCIEXTripleQuad?4500MD液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測系統(tǒng)、Waters?ACQUITYI-X超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)、Waters?Acquity超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜系統(tǒng)上進(jìn)行的性能評估資料。

1.精密度申請人采用三批次試劑盒分別進(jìn)行了不同因素間的精密度研究。分別使用正常內(nèi)源水平樣本、醫(yī)學(xué)決定水平樣本和臨床高值水平樣本進(jìn)行測試。結(jié)果顯示所有分析物的CV≤25%（內(nèi)源濃度樣本除外）。

2.正確度（回收試驗）申請人采用三批次試劑盒進(jìn)行測試。采用回收實驗方法進(jìn)行正確度的評價。結(jié)果表明：分析物的回收率結(jié)果在可接受范圍內(nèi)（80%-120%）。

3.線性申請人采用三批次試劑盒進(jìn)行測試。使用正常人血作為基質(zhì)，添加分析物以覆蓋臨床高值濃度的水平，梯度稀釋后得到12個水平的線性樣本，建立線性范圍，所有分析物的線性回歸系數(shù)R不低于0.9900。使用企業(yè)線性參考品進(jìn)行測試，所有分析物的線性回歸系數(shù)R不低于0.9900。

4.靈敏度申請人采用三批次試劑盒，通過檢測系列稀釋的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度來模擬進(jìn)行研究檢測限。將內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品工作液進(jìn)行17個連續(xù)稀釋，得到18個濃度的內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品溶液，對高低質(zhì)控品進(jìn)行萃取并進(jìn)行混合。對連續(xù)4個濃度內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品萃取結(jié)果的線性和精密度進(jìn)行計算。當(dāng)線性R不低于0.99且CV不高于25%時，血樣中最低內(nèi)標(biāo)的理論濃度即為對應(yīng)分析物的靈敏度。所有質(zhì)控品分析物功能靈敏度均不高于各分析物的典型內(nèi)源濃度水平。

5.干擾申請人對潛在的內(nèi)源性干擾物質(zhì)以及外源干擾物在不同濃度下，比較干擾物添加前后內(nèi)源水平DBS和醫(yī)學(xué)決定水平DBS中各分析物濃度的偏差。結(jié)果表明：膽紅素(0.15g/L)，甘油三酯(10g/L)，血紅蛋白(220g/L)，骨化二醇(250nmol/L)，對乙酰氨基酚(55mg/L)，L-谷氨酸(3000μmol/L)，肌氨酸(125μmol/L)，肌酸(6000μmol/L)，L-天冬酰胺(1500μmol/L)，L-賴氨酸(2000μmol/L)，L-蛋氨酸砜(500μmol/L)，白蛋白(30g/L)，利多卡因(38.4μmol/L)，D617(2.23μmol/L)，L-鳥氨酸(375μmol/L)，亞胺甲基谷氨酸(37.1μmol/L)，O-乙?；?L-絲氨酸(1000μmol/L)，2,5-二羥基苯甲酸(127μmol/L)，普萘洛爾(7.74μmol/L)，4-氨酰安替比林(500μmol/L)，?；鞘懰?30.5μmol/L)，DL-羥基丁二酸(3000μmol/L)，6-氨基乙酸(6.07μmol/L)，葡萄糖酸氯己定(0.04%)等在其驗證最大濃度條件下對試劑盒分析物的檢測不產(chǎn)生影響。試劑盒可滿足常規(guī)檢測的要求。

6.殘留申請人采用企業(yè)線性參考品進(jìn)行研究，考察高濃度樣本殘留對內(nèi)源樣本檢測的影響。結(jié)果表明除Val,Asa有殘留影響外，其余分析物對應(yīng)的偏差均在±1SD范圍內(nèi)。Val和Asa的影響程度在臨床實際使用中，并不會影響對測試結(jié)果的判斷。

7.漂移

申請人采用連續(xù)運行10塊測試板考察檢測方法結(jié)果的穩(wěn)定性。結(jié)果表明：內(nèi)源濃度樣本（除SA和Asa外）、陽性判斷值附近濃度樣本和高值樣本的各個總CV均在25%以內(nèi)。首、末板之間的漂移不會影響試劑盒的功能性檢測。

（四）陽性判斷值或參考區(qū)間研究

申請人使用本產(chǎn)品對2075例臨床樣本進(jìn)行檢測，以0.5%-99.5%為基礎(chǔ)，建立參考范圍。其中部分疾病根據(jù)已有資料或文獻(xiàn)，對分析物下限或上限進(jìn)行了調(diào)整（如C0,ADO等）。

同時，將本試劑盒檢測結(jié)果與臨床診斷結(jié)果進(jìn)行了比較，驗證了試劑陽性判斷值設(shè)定的合理性。

在實際的臨床應(yīng)用中，除了分析物本身的濃度值外，不同分析物的比例值在某些情況下也具有一定的參考意義。對這些比例值，按百分位0.5%-99.5%統(tǒng)計了參考范圍，可用于輔助判斷或分析。

（五）穩(wěn)定性研究

申請人對該產(chǎn)品的實時穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性以及樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，確定了在各種條件下該產(chǎn)品及樣本的有效保存時間。

實時穩(wěn)定性：選取三批試劑盒置于規(guī)定的儲存環(huán)境中，A盒在2-8°C條件下儲存，B盒在2-30°C條件下儲存，分別于0、3、6、9和13個月時，對試劑盒準(zhǔn)確度、重復(fù)性、線性、靈敏度進(jìn)行考察。確定產(chǎn)品在規(guī)定的儲存條件下，有效期為12個月。

此外，申請人對產(chǎn)品的運輸穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性等分別進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示，產(chǎn)品的性能均滿足產(chǎn)品說明書的聲稱。

三、臨床評價概述

申請人在浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院、上海市兒童醫(yī)院、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院、濟(jì)南市婦幼保健院共4家臨床試驗機(jī)構(gòu)完成了臨床試驗。

臨床試驗主要包括兩部分內(nèi)容：第一部分，采用試驗用體外診斷試劑與臨床診斷結(jié)果進(jìn)行比較研究，評價本產(chǎn)品的靈敏度、特異度、陰性預(yù)測值等指標(biāo)。

臨床試驗前瞻性入組的21082例干血斑樣本中，檢出并經(jīng)臨床確診陽性的疾病包括有苯丙酮尿癥（PKU）、原發(fā)性肉堿缺乏癥（PCD）、甲基丙二酸血癥（MMA）等。

臨床試驗結(jié)果顯示，對樣本的檢測結(jié)果以疾病的首要指標(biāo)按照說明書參考范圍判讀分析，試驗用體外診斷試劑針對氨基酸（AA）代謝病的檢測靈敏度為100.00%，特異度為95.36%，假陽性率為4.64%，假陰性率為0，陽性似然比為21.54，陰性似然比為0，陽性預(yù)測值為0.51%，陰性預(yù)測值為100.00%；對脂肪酸氧化（FAO）代謝病的檢測靈敏度為100.00%，特異度為97.69%，假陽性率為2.31%，假陰性率為0，陽性似然比為43.35，陰性似然比為0，陽性預(yù)測值為1.03%，陰性預(yù)測值為100.00%；對有機(jī)酸（OA）代謝病的檢測靈敏度為100.00%，特異度為96.89%，假陽性率為3.11%，假陰性率為0，陽性似然比為32.17，陰性似然比為0，陽性預(yù)測值為1.22%，陰性預(yù)測值為100.00%。對樣本的檢測結(jié)果以臨床應(yīng)用結(jié)合次要指標(biāo)判讀分析，試驗用體外診斷試劑對氨基酸（AA）代謝病的檢測靈敏度為100.00%，特異度為98.93%，假陽性率為1.07%，假陰性率為0，陽性似然比為93.08，陰性似然比為0，陽性預(yù)測值為2.18%，陰性預(yù)測值為100.00%；對脂肪酸氧化（FAO）代謝病的檢測靈敏度為100.00%，特異度為99.62%，假陽性率為0.38%，假陰性率為0，陽性似然比為263.94，陰性似然比為0，陽性預(yù)測值為5.95%，陰性預(yù)測值為100.00%；對有機(jī)酸（OA）代謝病的檢測靈敏度為100.00%，特異度為99.50%，假陽性率為0.50%，假陰性率為0，陽性似然比為200.46，陰性似然比為0，陽性預(yù)測值為7.14%，陰性預(yù)測值為100.00%。

臨床試驗回顧性入組的226例干血斑樣本中，臨床確診陽性的疾病包括有高苯丙氨酸血癥（HPA）、苯丙酮尿癥（PKU）、四氫生物蝶呤缺乏癥（BH4D）、精氨酰琥珀酸尿癥（ASA）、瓜氨酸血癥Ⅰ型（CITI）、希特林蛋白缺乏癥（新生兒肝內(nèi)膽汁淤積癥/瓜氨酸血癥Ⅱ型）（CITRIN（NICCD/CITⅡ））、高甲硫氨酸血癥（MET）、楓糖尿病（MSUD）、鳥氨酸氨甲酰轉(zhuǎn)移酶缺乏癥（OTCD）、酪氨酸血癥Ⅰ型（TYRI）、酪氨酸血癥II型（TYRII）、酪氨酸血癥Ⅲ型（TYRIII）、精氨酸血癥（ARG）、同型半胱氨酸血癥（HCY）、高脯氨酸血癥（PRO）、氨甲酰磷酸合成酶1缺乏癥（CPS1）、原發(fā)性肉堿缺乏癥（PCD）、短鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥（SCAD）、中鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥（MCAD）、極長鏈?；o酶A脫氫酶缺乏癥（VLCAD）、肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶I缺乏癥（CPT-I）、多種?；o酶A脫氫酶缺乏癥（GAII）、三功能蛋白缺乏癥（TFP）、甲基丙二酸血癥（MMA）、甲基丙二酸血癥合并同型半胱氨酸血癥（MMA合并HCY）、丙酸血癥（PA）、異丁酰輔酶A脫氫酶缺乏癥（IBG）、異戊酸血癥（IVA）、戊二酸血癥I型（GAI）、3-甲基巴豆酰輔酶A羧化酶缺乏癥（MCCD）、β酮基硫解酶缺乏癥（βKT）、2-甲基丁酰輔酶A水解酶缺乏癥（2MBG）、3-羥基-3-甲基戊二酸血癥（HMG）、全羧化酶合成酶缺乏癥（MCD）、腺苷脫氨酶缺陷重癥聯(lián)合免疫缺陷（ADA-SCID）、X-連鎖腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良（X-ALD）?；仡櫺栽囼灲Y(jié)果顯示，試驗用體外診斷試劑對氨基酸（AA）代謝病、脂肪酸氧化（FAO）代謝病、有機(jī)酸（OA）代謝病、嘌呤代謝病ADA-SCID、過氧化物酶體病X-ALD的檢測靈敏度均為100.00%。

第二部分，采用試驗用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行對比試驗，驗證本產(chǎn)品的臨床準(zhǔn)確性。

該部分臨床試驗共入組2143例干血斑樣本，臨床試驗結(jié)果顯示，對樣本的檢測結(jié)果以疾病的首要指標(biāo)按申報產(chǎn)品與對比試劑各自參考范圍判讀分析，試驗用體外診斷試劑與對比試劑針對氨基酸（AA）代謝病檢測的陽性符合率為78.87%，陰性符合率為95.46%，總符合率為94.91%；對脂肪酸氧化（FAO）代謝病檢測的陽性符合率為95.56%，陰性符合率為97.28%，總符合率為97.25%；對有機(jī)酸（OA）代謝病檢測的陽性符合率為96.43%，陰性符合率為97.13%，總符合率為97.11%。進(jìn)一步分析試驗用體外診斷試劑與對比試劑針對氨基酸（AA）代謝病檢測的陽性符合率較低的原因，主要是由于兩者使用不同的參考范圍各自產(chǎn)生不同的假陽性結(jié)果，從而導(dǎo)致比較差異。繼續(xù)對樣本的檢測結(jié)果以臨床應(yīng)用結(jié)合次要指標(biāo)判讀分析，試驗用體外診斷試劑與對比試劑針對氨基酸（AA）代謝病檢測的陽性符合率為95.00%，陰性符合率為99.00%，總符合率為98.93%；對脂肪酸氧化（FAO）代謝病檢測的陽性符合率為94.29%，陰性符合率為99.67%，總符合率為99.58%；對有機(jī)酸（OA）代謝病檢測的陽性符合率為91.30%，陰性符合率為99.62%，總符合率為99.44%。

對兩種方法檢測結(jié)果進(jìn)行線性回歸分析，結(jié)果顯示，對于疾病判讀應(yīng)用的主要分析物如Phe、C3、C0等分析物，相關(guān)系數(shù)R均＞0.95，表明兩種試劑盒相關(guān)性較好。

除對不同疾病類型進(jìn)行分析外，還對每一種疾病和每一種分析物（分析物比值）分別進(jìn)行了統(tǒng)計分析，結(jié)果顯示，試驗用體外診斷試劑各待測分析物（分析物比值）指標(biāo)異常情況都通過相應(yīng)的遺傳代謝病得到驗證，各分析物（分析物比值）統(tǒng)計得到的陰性預(yù)測值均為100.00%。同時，其余相關(guān)性能指標(biāo)也都符合臨床應(yīng)用要求。

綜上所述，該產(chǎn)品臨床試驗資料對產(chǎn)品的臨床性能進(jìn)行了全面研究，臨床試驗結(jié)果基本符合臨床應(yīng)用要求。?

四、產(chǎn)品受益風(fēng)險判定

（一）受益評估

該試劑盒用于定量檢測新生兒全血干血斑中的氨基酸、琥珀酰丙酮、游離肉堿，?；鈮A，腺苷和溶血卵磷脂的濃度?？赏瑫r對幾十種疾病進(jìn)行分析，包括氨基酸(AA)代謝病、脂肪酸氧化(FAO)代謝病、有機(jī)酸(OA)代謝病、嘌呤代謝病和過氧化物酶體病，其中嘌呤代謝病和過氧化物酶體病這兩類疾病通過干血斑質(zhì)譜法檢測在國內(nèi)尚無同類產(chǎn)品。

該產(chǎn)品臨床應(yīng)用的主要受益在于：在新生兒早期提示風(fēng)險，使患者能及時診斷和治療，從而受益。

經(jīng)臨床評價分析，本產(chǎn)品的臨床靈敏度和特異度可滿足臨床檢驗要求。

（二）風(fēng)險評估

參照“YY/T 0316-2016醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用”標(biāo)準(zhǔn)，對該產(chǎn)品進(jìn)行風(fēng)險分析。

該產(chǎn)品主要的風(fēng)險來自于檢測存在的假陽性和假陰性情況。假陽性風(fēng)險會導(dǎo)致被檢測者需要進(jìn)行復(fù)查復(fù)測，并可能需要通過基因檢測進(jìn)一步確認(rèn)或排除。這會對被檢測者產(chǎn)生一定的經(jīng)濟(jì)和時間影響。假陰性風(fēng)險會導(dǎo)致患者未及時治療，可能會導(dǎo)致患者生長發(fā)育受影響。從已有結(jié)果分析，鳥氨酸氨甲?；D(zhuǎn)移酶缺乏癥因其X-連鎖的特性，該產(chǎn)品在女性患者中無法檢出指標(biāo)物異常，有較大的漏檢風(fēng)險。

除上述外，產(chǎn)品已知的檢測局限性包括：對于Asa極高濃度的樣本，可能會對下一個測試產(chǎn)生殘留；Asa和Sa的回收率較低，測試值不能代表其精確濃度。

此外，檢測結(jié)果會受到如下條件的影響，包括：樣品點并未被血均勻浸透，打沖樣本時采樣點太靠近血斑的邊緣，樣本收集或晾干過程中處置不當(dāng)，樣本受熱受潮或降解，血斑濾紙受排泄物污染。使用者必須了解檢測過程中可能存在的潛在風(fēng)險及檢測的局限性。

（三）風(fēng)險受益評價結(jié)論

根據(jù)申請人提供的申報資料，經(jīng)綜合評價，在目前認(rèn)知水平上，認(rèn)為該產(chǎn)品能夠較大程度地滿足醫(yī)療需求，預(yù)期為適用人群帶來的受益大于風(fēng)險。

為確保使用安全，基于對主要剩余風(fēng)險的防控，在產(chǎn)品說明書中介紹了該產(chǎn)品檢驗方法的局限性及使用中的注意事項。

綜合評價意見?

本申報項目為境內(nèi)第三類醫(yī)療器械產(chǎn)品注冊，屬于優(yōu)先審批項目（編號：20190009）。申請人的注冊申報資料符合現(xiàn)行要求，依據(jù)《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》（國務(wù)院令第680號）、《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令2014年第5號）等相關(guān)醫(yī)療器械法規(guī)與配套規(guī)章，經(jīng)系統(tǒng)評價后，建議準(zhǔn)予注冊。延續(xù)注冊時補(bǔ)充提交至少十家臨床機(jī)構(gòu)、至少十萬例新生兒新鮮干血斑樣本的前瞻性臨床試驗資料，可不設(shè)對照組，但應(yīng)由臨床機(jī)構(gòu)對診斷結(jié)果進(jìn)行確認(rèn)。對于本次新增的兩種疾病（X-連鎖腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良和腺苷脫氨酶缺陷重癥聯(lián)合免疫缺陷），應(yīng)前瞻性的檢出真陽性病例。在延續(xù)注冊時，注冊人應(yīng)依據(jù)上市后的臨床使用數(shù)據(jù)進(jìn)一步修訂說明書臨床性能相關(guān)內(nèi)容。

2022年3月23日

附件：產(chǎn)品說明書